利用基因定點修飾技術(shù)CRISPR-Cas系統(tǒng)，可快速地在單倍體干細胞上進行定位的基因修飾或敲除，并且處理后的細胞仍能維持單倍體和多能性狀態(tài)。尤為重要的是，該工作證明了大鼠單倍體胚胎干細胞同樣具有替代精子與卵母細胞“受精”并產(chǎn)生健康大鼠的能力。 單倍體胚胎干細胞同時具有單倍體細胞和胚胎干細胞的特性，由于其只含有一套染色體，不存在等位基因在基因功能上的補償作用，因此是研究隱性基因功能的理想模型。同時，其胚胎干細胞的特性又可以將基因修飾直接遺傳給后代，從而避免了其他轉(zhuǎn)基因方法種系嵌合等方面的要求，可以極大提高基因修飾的效率及應(yīng)用范圍。 通過種系嵌合和替代精子進行卵胞質(zhì)注射兩種途徑，該團隊都成功獲得了健康的攜帶基因修飾的大鼠，從而證明大鼠孤雄單倍體胚胎干細胞可以將基因修飾快速地遺傳給后代，為研究基因功能提供了便利。 此外，也對*大鼠ELISA試劑盒進行了研究，應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中大鼠性激素結(jié)合球蛋白（SHBG）elisa試劑盒 水平。用純化的大鼠性激素結(jié)合球蛋白（SHBG）elisa試劑盒使用說明書抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入類性激素結(jié)合球蛋白（SHBG）elisa試劑盒 ，再與HRP標(biāo)記的類性激素結(jié)合球蛋白（SHBG）elisa試劑盒 抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的類性激素結(jié)合球蛋白（SHBG）elisa試劑盒 呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中大鼠性激素結(jié)合球蛋白（SHBG）elisa試劑盒 濃度。 此次的研究成果從小鼠之外的哺乳動物中獲得了具有發(fā)育功能的單倍體胚胎干細胞系，而且利用CRISPR-Cas技術(shù)完成對大鼠單倍體胚胎干細胞的多基因敲除，為建立用于大規(guī)?；蚝Y選的純合的基因突變細胞庫打下基礎(chǔ)。鑒于大鼠在生理上比小鼠更類似于人類，這一工作將對人類疾病模型研發(fā)和開展基因功能研究起到重要的推動作用。 |
