【產(chǎn)品名稱】 通用名稱：豬口蹄疫病毒抗體（IgG）診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法） 英文名稱：Porcine Foot and Mouth Disease Virus Antibody Test Kit （ELISA）, FMDV Ab 【包裝規(guī)格】 96×1測(cè)試/盒 【預(yù)期用途】 本試劑盒用于定性測(cè)定豬血清中O型口蹄疫病毒IgG抗體。用于評(píng)估豬場(chǎng)豬口蹄疫疫苗免疫狀況，感染豬的血清學(xué)診斷以及豬口蹄疫的流行病學(xué)調(diào)查。 【檢驗(yàn)原理】 本試劑盒應(yīng)用固相酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）原理，由包被有高純度的豬口蹄疫抗原的微孔反應(yīng)板、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗豬IgG及其它試劑配套組成。其反應(yīng)機(jī)理為包被抗原與樣本中的FMDV-IgG結(jié)合，再與酶標(biāo)抗豬IgG抗體形成“包被抗原+FMDV-IgG+酶標(biāo)抗豬IgG抗體”復(fù)合物，加入顯色劑，通過(guò)酶催化反應(yīng)顯色。顯色深淺與FMDV-IgG的量成正比，當(dāng)顯色超過(guò)設(shè)定的臨界值時(shí)結(jié)果判為陽(yáng)性，表明免疫有效或有自然感染。 【主要組成成份】 | 1． | FMDV抗原包被板 | 96T×1塊 | 包被有FMDV抗原 | | 2． | 酶標(biāo)記物（黃蓋） | 22ml×1瓶 | 含辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗豬IgG抗體 | | 3． | 樣本稀釋液（透明蓋） | 50ml×1瓶 | 主要成份為0.01M PBS緩沖液 | | 4． | 濃縮洗滌液（20×）（白蓋） | 50ml×1瓶 | PBST緩沖液，用前用去離子水20倍稀釋 | | 5． | FMDV-IgG陰性對(duì)照血清（綠蓋） | 1.5ml×1瓶 | 主要成份為FMDV-IgG陰性血清 | | 6． | FMDV-IgG陽(yáng)性對(duì)照血清（紅蓋） | 1.5ml×1瓶 | 主要成份為FMDV-IgG陽(yáng)性血清 | | 7． | 顯色劑A（紫蓋） | 12ml×1瓶 | 主要成份為過(guò)氧化脲 | | 8． | 顯色劑B（黃蓋） | 12ml×1瓶 | 主要成份為TMB | | 9． | 終止液（藍(lán)蓋） | 12ml×1瓶 | 主要成份為HF | | 10． | 蓋板膜 | 6張 | | | 11． | 說(shuō)明書(shū) | 1份 | | 不同批號(hào)的試劑組份不可混用。 【儲(chǔ)存條件及有效期】 于2℃～8℃避光保存，防止冷凍，有效期6個(gè)月。 【適用儀器】 1．酶標(biāo)儀，單波長(zhǎng)630nm測(cè)量。 2．ELISA用洗板機(jī)。 3．微量移液器。 4．水浴箱或恒溫箱。 5．微量振蕩器。 【樣本要求】 1．本試劑檢測(cè)的樣本為豬血清，樣本應(yīng)無(wú)菌采集，2℃～8℃貯存不超過(guò)一周，長(zhǎng)期應(yīng)在-20℃以下保存。 2．避免使用嚴(yán)重溶血、有沉淀物、含懸浮纖維蛋白及污染長(zhǎng)菌的樣本。 3．樣本中含有常規(guī)用量的EDTA、枸櫞酸鈉或肝素鈉等抗凝劑不影響本實(shí)驗(yàn)。 【檢驗(yàn)方法】 1．加樣：根據(jù)樣本數(shù)量，取所需板條。設(shè)空白對(duì)照1孔（不加任何液體）；設(shè)陰、陽(yáng)性對(duì)照各2孔，分別加入不稀釋的陰、陽(yáng)性對(duì)照血清100μL于相應(yīng)孔中。其余為樣本孔，用樣品稀釋液將待檢樣品40倍稀釋后混勻（如將6μL樣本加到234μL樣品稀釋液中），每孔加入稀釋好的樣本100μL。 2．溫育：加好樣后振蕩10秒，充分混勻，置37℃溫育30分鐘。 3．洗板：甩去孔內(nèi)液體，用洗滌液（濃縮洗滌液用去離子水以20倍稀釋）注滿反應(yīng)板孔，洗滌3次，每次停留3分鐘，zui后一次洗后拍干。 4．加酶：每孔加酶標(biāo)記物100ul，注意：空白孔不加酶標(biāo)記物，也不加其他任何液體。 5．溫育：置37℃溫育30分鐘。 6．洗板：同上洗滌。 7．顯色：每孔加顯色劑A、B各50ul，振蕩混勻，室溫（25℃）避光反應(yīng)10分鐘。 8．終止：每孔加終止液50ul，振蕩10秒，充分混勻。終止后10分鐘內(nèi)讀數(shù)。 9．讀數(shù)：用酶標(biāo)儀單波長(zhǎng)630nm以空白孔調(diào)零，讀取各孔吸光度值（A值）。注意：若酶標(biāo)儀讀數(shù)前沒(méi)有以空白孔調(diào)零，則所得的結(jié)果均應(yīng)減去空白孔A值再做判定。 10．結(jié)果判定： 樣品A值大于0.4，判為FMDV-IgG陽(yáng)性；樣品A值在0.2到0.4之間，判為FMDV-IgG可疑；樣品A值小于0.2，判為FMDV-IgG陰性。 陰性對(duì)照血清A值應(yīng)小于0.20，陽(yáng)性對(duì)照血清A值應(yīng)大于或等于0.40，否則試驗(yàn)不成立，需重新試驗(yàn)。 注意：若酶標(biāo)儀讀數(shù)前沒(méi)有以空白孔調(diào)零，則上述所有測(cè)得的結(jié)果均應(yīng)減去空白孔A值再做判定。 【參考值（參考范圍）】 未自然感染也未被免疫豬口蹄疫病毒疫苗的健康豬群為陰性，A值小于0.2。 【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】 1．嚴(yán)重溶血、血清中纖維蛋白分離不充分、含紅血球、有沉淀物、長(zhǎng)菌的樣本可能導(dǎo)致假陽(yáng)性。 2．因個(gè)體差異或免疫時(shí)間長(zhǎng)短等因素可能會(huì)出現(xiàn)個(gè)別豬只免疫疫苗后檢測(cè)結(jié)果為陰性。 3．陽(yáng)性結(jié)果用于感染豬的血清學(xué)診斷以及的流行病學(xué)調(diào)查時(shí)需結(jié)合其他方法和臨床資料進(jìn)行。 【檢驗(yàn)方法的局限性】 FMDV-IgG可作為評(píng)價(jià)豬口蹄疫疫苗免疫效果以及豬口蹄疫病毒感染的血清學(xué)診斷指標(biāo)，但不能區(qū)別二者，若想確認(rèn)是疫苗還是野毒感染產(chǎn)生的抗體需結(jié)合臨床資料、免疫程序或口蹄疫野毒鑒別ELISA試劑盒來(lái)區(qū)分。 【產(chǎn)品性能指標(biāo)】 1．特異性 以本品檢測(cè)30份陰性參比血清不出假陽(yáng)性。 2．敏感性 以本品檢測(cè)30份陽(yáng)性參比血清不出現(xiàn)陰性。 3．精密性 用精密性參比品測(cè)定，CV（%）不高于15%（n=10）。 4．穩(wěn)定性 試劑盒在2℃～8℃放置6個(gè)月或37℃放置3天，檢定結(jié)果達(dá)到以上1-3標(biāo)準(zhǔn)。 【注意事項(xiàng)】 1．本試劑盒僅用于體外診斷。 2．本試劑盒應(yīng)按含有傳染性材料對(duì)待，操作時(shí)需戴手套穿工作衣。 3．實(shí)驗(yàn)廢棄物應(yīng)經(jīng)121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘，或用5.0g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30分鐘后廢棄。 4．微孔板從冷藏環(huán)境中取出時(shí)應(yīng)在室溫中平衡至潮氣干盡后方可拆開(kāi)，未用完的微孔板須放回有干燥劑的鋁箔袋并密封4℃保存。未用完的液體試劑應(yīng)蓋好瓶蓋，與其它配套組份放入試劑盒中于2℃-8℃避光保存。 5．若20倍濃縮洗滌液出現(xiàn)結(jié)晶，屬正?，F(xiàn)象，放置37℃至溶解后即可。 6．應(yīng)用微量移液器加入樣本及試劑，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性。 7．加洗滌液時(shí)應(yīng)做到滿而不溢，防止孔口有游離酶不能洗凈或各孔間的交叉污染。 8．終止液有腐蝕性，若濺到皮膚或衣物上應(yīng)立即用大量清水沖洗干凈。 |
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