說明 本測(cè)試盒用間接競(jìng)爭(zhēng)免疫分析法定量測(cè)定玉米中的伏馬菌素B1（FB1）。該測(cè)試盒反應(yīng)孔可拆卸，可測(cè)單份樣品，也可測(cè)多份樣品，定量分析時(shí)需有微孔板酶標(biāo)儀。 一、概要 FB1是由串珠鐮刀菌產(chǎn)生的真菌毒素，主要污染玉米及其制品。可誘發(fā)馬的腦白質(zhì)軟化癥和豬的肺水腫綜合癥。FB1對(duì)多種動(dòng)物有腎臟毒性、肝臟毒性作用，對(duì)大鼠肝細(xì)胞和雞巨噬細(xì)胞有細(xì)胞毒性。據(jù)報(bào)道，FB1與食管癌發(fā)病率有明顯相關(guān)性，癌癥研究中心把FB1劃分到2B組，即人類可能的致癌物。因此FB1對(duì)人類健康和畜牧業(yè)發(fā)展構(gòu)成潛在威脅，成為繼黃曲霉毒素后的又一個(gè)研究熱點(diǎn)。 目前檢測(cè)糧食和飼料中FB1的儀器方法有液相色譜、氣相色譜、質(zhì)譜和毛細(xì)管電泳法等，這些方法靈敏度較高，結(jié)果穩(wěn)定，但所需儀器設(shè)備昂貴，樣品準(zhǔn)備耗時(shí)長(zhǎng)，不適于大量樣品的篩選。本試劑盒是以應(yīng)用單克隆抗體為基礎(chǔ)的ELISA檢測(cè)方法，可以準(zhǔn)確快速檢測(cè)玉米中的FB1。 二、技術(shù)指標(biāo) 靈敏度： 試劑盒的靈敏度為10 ppb。 變異系數(shù)： 試劑盒條內(nèi)變異＜10%，條間變異＜15%。 回收率： 回收率為70%~120%。 檢測(cè)范圍： 試劑盒zui低檢出濃度為10ng/mL，校正曲線的線性范圍10ng/mL~200ng/mL。 交叉反應(yīng)： 交叉反應(yīng)系數(shù)小于1%。 三、測(cè)定原理 本試劑盒用固相酶聯(lián)免疫吸附原理，利用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA法進(jìn)行測(cè)定。用抗原包被微孔板，加入FB1標(biāo)準(zhǔn)品或樣品、FB1單克隆抗體進(jìn)行孵育后，將未與包被抗原結(jié)合的抗體洗去；再加入酶標(biāo)記的抗鼠IgG抗體（酶標(biāo)物）孵育，加入顯色液顯色，經(jīng)終止液終止后，用酶標(biāo)儀在450nm處測(cè)定OD值。 四、提供的物品 微孔板…………… 包被有FB1-BSA 5個(gè)濃度的FB1標(biāo)準(zhǔn)溶液（各0.5mL）： 標(biāo)準(zhǔn)1：0ng/mL ……………... 直接使用 標(biāo)準(zhǔn)2：10ng/mL …………直接使用 標(biāo)準(zhǔn)3：50ng/mL …………直接使用 標(biāo)準(zhǔn)4：100ng/mL……………直接使用 標(biāo)準(zhǔn)5：200ng/mL……………直接使用 抗F B1單克隆抗體溶液（6mL）..直接使用 酶標(biāo)物（12mL） ……………….直接使用 顯色液（12mL） ……………….直接使用 終止液（6mL） ……………….直接使用 濃縮洗液（30mL） ……………….稀釋使用 五、盒中未提供，需自備物品 【儀器】微孔板酶標(biāo)儀（可于450nm處測(cè)定）、振蕩器、粉碎機(jī)、微量移液器 【耗材】量筒、漏斗、容量瓶、快速定性濾紙 【試劑】氯化鈉（分析純）、甲醇（分析純）、純水、去離子水或蒸餾水 六、操作者注意事項(xiàng) ⒈標(biāo)準(zhǔn)溶液中含有FB1，應(yīng)特別小心。 ⒉終止液含有硫酸，避免接觸皮膚。 ⒊每次加樣后立即將所有試劑放回2~8℃。 ⒋每步加樣時(shí)間應(yīng)控制在5min內(nèi)。 ⒌孵育過程中應(yīng)避光。 ⒍不要使用過期試劑盒。 ⒎不要交叉使用不同批號(hào)的試劑盒中的試劑。 七、儲(chǔ)存條件 ⒈保存試劑盒于2~8℃。不要冷凍。 ⒉顯色液對(duì)光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。 ⒊將不用的微孔板放進(jìn)原鋁箔袋中，置2~8℃保存。 八、試劑變質(zhì)的標(biāo)志 標(biāo)準(zhǔn)1的吸光度值小于0.5個(gè)單位（A450nm<0.5）時(shí)，表示試劑可能變質(zhì)。 九、樣品處理程序 ⒈樣品應(yīng)當(dāng)保存在陰涼避光之處及冷藏保存。 ⒉取5g粉碎的有代表性的樣品，加1.25g氯化鈉及25mL70%（體積比）甲醇-水溶液。 ⒊強(qiáng)力振蕩3分鐘。 ⒋用快速定性濾紙過濾。 ⒌取1mL濾液，加1%氯化鈉溶液9mL進(jìn)行稀釋。 ⒍取50μL稀釋液進(jìn)行分析。 ⒎根據(jù)需要可以增減樣品量，但甲醇-水溶液的量也應(yīng)相應(yīng)增減。 樣本稀釋倍數(shù)：50倍 十、酶免疫分析程序 ⒈濃縮洗液為10倍濃縮液，使用時(shí)與純水、去離子水或蒸餾水按體積比1:9稀釋后使用。 ⒉取所需數(shù)量的板條插入微孔架，用洗液洗滌微孔板3min×2次。 ⒊加入50mL標(biāo)準(zhǔn)品或處理好的樣品到微孔，記錄樣品及標(biāo)準(zhǔn)的位置，每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)和樣品必須使用新的吸頭。 ⒋加入50mL抗體溶液到每個(gè)微孔（注意移液器管尖不要接觸到孔中的液體，避免交叉污染）中，37℃孵育90min。 ⒌甩掉孔中液體，用洗液洗滌微孔板3min×3次，zui后一次應(yīng)在吸水紙上拍打以*除去孔中液體。 ⒍每孔加入酶標(biāo)物100mL，37℃孵育60min。 ⒎用洗液洗滌微孔板3min×5次，zui后一次應(yīng)在吸水紙上拍打以*除去孔中液體。 ⒏每孔加入顯色液100mL，37℃孵育15min。 ⒐每孔加入終止液50mL，立即用酶標(biāo)儀在波長(zhǎng)450nm處測(cè)定吸光度值（OD值）。 十一、樣品濃度計(jì)算 以標(biāo)準(zhǔn)溶液OD值與標(biāo)準(zhǔn)1 OD值的比值為縱坐標(biāo)，所對(duì)應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度（ng/mL）的對(duì)數(shù)值為橫坐標(biāo)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)樣品OD值與標(biāo)準(zhǔn)1OD的比值，可從曲線上得到對(duì)應(yīng)點(diǎn)的橫坐標(biāo)，即為FB1濃度的對(duì)數(shù)值，求得反對(duì)數(shù)即為測(cè)定液中FB1濃度C（ng/mL），按下列公式計(jì)算出樣品中FB1含量： FB1含量（mg/kg）= C×K 式中： C：稀釋后樣品提取液中FB1含量（ng/mL） K：樣品稀釋倍數(shù)（按照本說明書中樣品處理程序方法為50） |
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