| 本試劑盒只能用于科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷 檢測(cè)原理 試劑盒采用雙抗原一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被豬輪狀病毒（RV）的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗原，經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），與CUT OFF值相比較，從而判定標(biāo)本中豬輪狀病毒（RV）的存在與否。 樣品收集、處理及保存方法 1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。 2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。 3. 細(xì)胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。 4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。 5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。 自備物品 1. 酶標(biāo)儀（450nm） 2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL 3. 37℃恒溫箱 操作注意事項(xiàng) 1. 試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶，這屬于正?，F(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再使用。 2. 實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。 3. 預(yù)處理后的樣本請(qǐng)按照操作步驟用樣本稀釋液適當(dāng)稀釋以達(dá)到試劑盒的的*檢測(cè)效果。 4. 嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。 5. 所有液體組分使用前充分搖勻。 試劑盒組成 | 名稱 | 96孔配置 | 48孔配置 | 備注 | | 微孔酶標(biāo)板 | 12孔×8條 | 12孔×4條 | 無 | | 陰性對(duì)照 | 0.5mL | 0.5mL | 無 | | 陽性對(duì)照 | 0.5mL | 0.5mL | 無 | | 檢測(cè)抗原-HRP | 10mL | 5mL | 無 | | 20×洗滌緩沖液 | 25mL | 15mL | 按說明書進(jìn)行稀釋 | | 樣本稀釋液 | 6mL | 3mL | 無 | | 底物A | 6mL | 3mL | 無 | | 底物B | 6mL | 3mL | 無 | | 終止液 | 6mL | 3mL | 無 | | 封板膜 | 2張 | 2張 | 無 | | 說明書 | 1份 | 1份 | 無 | | 自封袋 | 1個(gè) | 1個(gè) | 無 | 試劑的準(zhǔn)備 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。 洗板方法 1. 手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。 2. 自動(dòng)洗板機(jī)：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。 操作步驟 1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。 2. 設(shè)置陰、陽性對(duì)照孔和樣本孔，陰、陽性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽性對(duì)照各50μL； 3. 待測(cè)樣本孔先加待測(cè)樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL； 4. 隨后陰、陽性對(duì)照孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗原100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。 5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。 6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。 7. 每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。 結(jié)果判斷 1. 試驗(yàn)有效性：陽性對(duì)照孔OD值平均值≥1.00； 陰性對(duì)照孔OD值平均值≤0.15。 2. 臨界值（Cut off）計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15 3. 陰性判斷：樣品OD值＜臨界值（Cut off），樣品為陰性 4. 陽性判斷：樣品OD值＞臨界值（Cut off），樣品為陽性 試劑盒性能 1. 準(zhǔn)確性：陽性對(duì)照孔OD值平均值≥1.00；陰性對(duì)照孔OD值平均值≤0.15，說明試驗(yàn)結(jié)果有效。 2. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。 3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。 4. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。 5. 有效期：6個(gè)月 免責(zé)聲明 1. 試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或人體實(shí)驗(yàn)，否則所產(chǎn)生的一切后果，由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)，本公司概不負(fù)責(zé)。 2. 嚴(yán)格按照說明書操作，實(shí)驗(yàn)者違反說明書操作，后果由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)。 | 
會(huì)員_a.png)