本試劑盒僅供研究研究使用
預(yù)期應(yīng)用
ELISA法定量測定人血清、血漿、或其它相關(guān)液體中U-TSH含量。 實驗原理
本試劑盒應(yīng)用競爭抑制酶標(biāo)免疫分析法測定標(biāo)本中U-TSH水平。用純化的抗體包被微孔板，制成固相抗體，固相抗體與一定量的生物素標(biāo)記的T4和非標(biāo)記抗原（標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品）進(jìn)行競爭抑制反應(yīng)，待測定的標(biāo)本量越多，抗體與生物素標(biāo)記的U-TSH結(jié)合就越少，反之結(jié)合就多。zui后再加入HRP標(biāo)記的親和素，經(jīng)過*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的U-TSH呈負(fù)相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。 試劑盒組成
1． 酶聯(lián)板：一塊（96孔）
2． T4標(biāo)準(zhǔn)品：1ml/瓶×6瓶。其濃度依次為400 ng/mL，200 ng /mL ，100 ng /mL，50 ng /mL和 25ng /mL，0 ng/mL。
3． 檢測溶液A：1×10 ml
4． 檢測溶液B：1×10 ml
5． 底物溶液A：1×10 ml
6． 底物溶液B：1×10 ml
7． 濃洗滌液：1×30ml，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
8． 終止液：1×20ml。 標(biāo)本的采集及保存
1．血清：標(biāo)本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)?biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2．血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘，或?qū)?biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
注：標(biāo)本溶血會影響zui后檢測結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項檢測。 操作步驟
各試劑在使用前平衡至室溫。
1． 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。除空白孔外，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)溶液或待測樣品50μl，以及檢測溶液A 50μl，輕輕混勻，37℃，60分鐘。
2． 洗板3-5次，350μl/每孔，甩干。
3． 每孔加檢測溶液 B 50μl，37℃，30分鐘，洗板3-5次，甩干。
4． 依序每孔加底物溶液A、B各50μl，37℃避光顯色15分鐘。
5． 依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)。用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。
注：
1． 每次實驗留一孔作為空白調(diào)零孔，該孔不加任何試劑，只是zui后加底物溶液及2NH2SO4。測量時先用此孔調(diào)OD值至零。
2．為防止樣品蒸發(fā)，試驗時將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)。 洗板方法
手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體；在實驗臺上鋪墊幾層
吸水紙，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次；將推薦的洗滌緩沖液至少0.4ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘，根據(jù)需要，重復(fù)此過程數(shù)次。
自動洗板：如果有自動洗板機(jī)，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實驗過程中。 特異性
本試劑盒可同時檢測重組或天然的人U-TSH，且與其它相關(guān)蛋白無交叉反應(yīng)。 檢測范圍：
0.15 ng /mL -1000 ng /mL 計算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)（對數(shù)坐標(biāo)），OD值為縱坐標(biāo)（普通坐標(biāo)），在半對數(shù)坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。 注意事項
1． 洗滌過程非常重要，不充分的洗滌易造成假陽性。
2． 一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
3． 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。
4． 如標(biāo)本中T4含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請zui后乘以稀釋倍數(shù)。
5． 底物請避光保存。
6．溫育反應(yīng)過程中請?zhí)衬z板 說明
1.在儲存及孵育過程中避免將試劑暴露在強(qiáng)光中。所有試劑瓶蓋須蓋緊以防止蒸發(fā)和污染，試劑避免受到微生物的污染，因為蛋白水解酶的干擾將導(dǎo)致出現(xiàn)錯誤的結(jié)果。
2. 小心吸取試劑并嚴(yán)格遵守給定的孵育時間和溫度。請注意在吸取標(biāo)本 / 標(biāo)準(zhǔn)品，酶結(jié)合物或底物時，*個孔與zui后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導(dǎo)致不同的 “預(yù)孵育”時間，從而明顯地影響到測量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。而且，洗滌不充分將影響試驗結(jié)果。
3. 試劑盒保存：部分試劑保存于-20℃，部分試劑保存于2-8℃，具體以標(biāo)簽上的標(biāo)示為準(zhǔn)。
4. 濃洗滌液會有鹽析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶。
5. 剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會含有少許水樣物質(zhì)，此為正?，F(xiàn)象，不會對實驗結(jié)果造成任何影響。
6. 中、英文說明書可能會有不一致之處，請以英文說明書為準(zhǔn)。
7. 所有的樣品都應(yīng)管理好，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。 |
